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内标定量与表标定量对比 ？

2016-07-07 16:23
  由于传统定量步骤都是终点检测，即PCR达到平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增达到平台期时，检测巢轮性极差。统一个模板在96孔PCR仪上做96次沉复尝试，所得了局有很大差距，因而无法直接从终点产品推算出肇始模板量。参与内标后，可部门解除终产品定量所造成的不正确性。但即便如此，传统的定量步骤也都只能算作半定量、粗略定量的步骤。  内标定量：若在待测样品中参与已知肇始拷贝数的内标，则PCR反映变为双沉PCR，他们之间存在两种模板之间的滋扰和竞争，尤其当两种模板的肇始拷贝数相差比力大时，这种竞争会阐发得更为显著。但由于待测样品的肇始拷贝数是未知的，所以无法参与相宜数量的已知模板作为内标，也正是这个原因，传统定量步骤固然参与内标，但依然只是一种半定量的步骤。  表标定量：表标法不是把尺度物质参与到被测样品中，而是与被测样品在一样前提下进行检测。由于在荧光定量PCR中，Ct值与肇始模板的对数存在线性关系，因而能够利用尺度曲线对未知样品进行定量测定，并且在PCR循环刚刚进入真正的指数扩增期时，Ct值的巢轮性极好，即统一模板分歧功夫扩增或统一功夫分歧管内扩增，得到的Ct值是恒定的，因而定量的了局也会正确好多。  美国Texas大学的科研人员进行了表标法定量和内标法定量的步骤学比力，得出的结论是：内标法作为定量或半定量的伎俩是不成靠的，而表尺度曲线的定量步骤是一种正确的、值得信任的科学步骤。【Ke LD, Chen Z, Yung WK.A reliability test of standard-based quantitative PCR: exogenous vs endogenous standards. Mol.Cell Probes,2000,14(2):127-135】
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